微波輔助水提取云南鳳尾茶總黃酮工藝的研究鳳尾茶（Elsholtzia bodinieri Vaniot），又名東紫蘇、野山茶、涼茶、牙刷草、小香薷等，為唇形科香薷屬一年生草本植物，生于山坡、路旁草叢中或灌木林下。主要分布在云南、甘肅、四川、青海等西部地區(qū)，是一種常用的民間中草藥。其味甘苦微辛、性平，具有發(fā)散解表，理氣和胃之功效，主治外感風(fēng)寒、頭身痛、咽喉痛、消化不良和肝炎等癥。據(jù)本草考證，香薷屬植物最早記載為藥食兼用，后在應(yīng)用中各有側(cè)重而出現(xiàn)藥食功能分離。鳳尾茶是目前該屬植物唯一保留食用功能的品種。滇南各少數(shù)民族由于喜食腥燥食物，常以鳳尾茶作為日常茶飲。據(jù)報(bào)道，鳳尾茶的化學(xué)成分主要含有黃酮類化合物、揮發(fā)油、萜類和甾體等。已有研究對鳳尾茶總黃酮的提取均采用了有機(jī)溶劑乙醇，如胡浩斌等采用微波輔助流動萃取法對甘肅東紫蘇中的黃酮類成分進(jìn)行了提取和測定，確定了最佳提取工藝條件，證明根中的含量最高為133.7mg／g，莖次之為78.51mg／g，葉中較低為25.47mg。陳海云等用A1C13分光光度法對云南風(fēng)尾茶中總黃酮的含量進(jìn)行了分析，結(jié)果表明風(fēng)尾茶中黃酮主要集中在葉部，根部含量最少，全株含量為10.49％。而熱水浸提鳳尾茶的研究未見報(bào)道。水提取法具有簡單易行、安全性高、投入資金少的特點(diǎn)，且日常生活中鳳尾茶也是以水沖泡進(jìn)行飲用的，所以以水為溶劑提取鳳尾茶中的總黃酮具有一定的研究意義。與天然產(chǎn)物的傳統(tǒng)提取方法比較，微波輔助提取技術(shù)具有方便、省時(shí)、能耗少等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)采用微波輔助的方法，以水為溶劑對云南風(fēng)尾茶中的總黃酮進(jìn)行提取，測定了總黃酮的提取率，確定了最佳提取工藝條件。并與熱水浸提比較，證明微波提取法確實(shí)是一種高效快捷且浸提率高的方法。
1材料與方法
l。l材料與儀器
鳳尾茶采自云南省建水縣。蘆丁對照品，購于中國藥品生物制品檢定所；其他試劑均為分析純。G8023ETL.V8微波爐，順德格蘭仕電器有限公司；FA1004電子天平，上海天平儀器廠；722光柵分光光度計(jì)，上海分析儀器廠。
1.2方法與步驟
l_2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定：
鳳尾茶中總黃酮含量的測定采用AICI3比色法。準(zhǔn)確稱取在120~C干燥至恒重的蘆丁對照品5.0mg，加無水乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中，搖勻。準(zhǔn)確地吸取此溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中，精密加0.Imol／L的三氯化鋁溶液3mL，HAc-NaAc緩沖溶液（pH5.8）定容至刻度。放置30min，用第一瓶溶液作空白，在波長420nm處測定吸光度，以質(zhì)量濃度（mg／mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得回歸方程y：0.1076+1.828X.r=0.9978。
1.2.2樣品的提取及總黃酮含量的測定：
鳳尾茶全草，粉碎，過20目篩備用。精密稱取一定量樣品，按一定的料液比，加入90~C熱水并保溫30min后，放入微波爐中，選擇適當(dāng)?shù)墓β屎蜁r(shí)間提取，取出定容、過濾。精確吸取lmL，稀釋5倍，加入試劑和方法同“1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制定”。根據(jù)所測吸光度和標(biāo)準(zhǔn)曲線得出微波輔助水提法總黃酮的含量。總黃酮提取率=（總黃酮質(zhì)量濃度×定容體積）x5／樣品質(zhì)量×100％
1.2.3提取工藝的單因素考察
1.2.3.1不同料液比對提取率的影響
分別以20、30、40、50、60倍的90℃熱水對鳳尾茶保溫30min后，300W微波加熱5min，發(fā)現(xiàn)總黃酮的提取率在料液比為1：40時(shí)最高。
1.2.3.2不同微波提取時(shí)問對提取率的影響
以40倍熱水對樣品保溫浸提30min后，300W微波加熱2min、5min、10mill、15min后，結(jié)果為總黃酮的提取率在加熱5min時(shí)達(dá)到一個(gè)峰值。
1.2.3_3微波功率對提取率的影響
以40倍熱水對樣品保溫浸提30min后，選擇200W、300W、400W、500W、600W五個(gè)功率檔分別對樣品進(jìn)行加熱提取，結(jié)果表明總黃酮提取率在400W時(shí)增加最快，600W時(shí)提取率最低。
1.2.4正交試驗(yàn)優(yōu)化
在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取微波功率、提取時(shí)間、料液比作為影響提取效果的主要因素，進(jìn)行3因素、3水平正交試驗(yàn)（表1）。并對結(jié)果進(jìn)行極差和方差分析。
1.2.5方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率實(shí)驗(yàn)
精密稱取樣品5份，根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳實(shí)驗(yàn)條件，對鳳尾茶樣品中黃酮類成分的含量進(jìn)行測定。精密吸取樣品總黃酮提取液0.5mL共5份，分別加入不同體積的10ug/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。在60min內(nèi)每隔15min分別測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的吸光度以確定方法的穩(wěn)定性。
1.2.6熱水浸提與微波水提取的比較90℃熱水浸提30min，測定黃酮含量；采用最佳提取工藝條件，但不經(jīng)90℃熱水浸提30min，比較兩種方法的提取率。
2結(jié)果與分析
2.1正交試驗(yàn)結(jié)果
表1因素水平
表2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果
由正交試驗(yàn)的極差分析可知，各因素影響順序?yàn)锳>C>B，即時(shí)間>溶劑用量>功率，最佳工藝條件為A2B2C1，即提取時(shí)間5min，微波功率400w，溶劑用量為30倍。空白列即誤差列的R值小于各因素的值，因此試驗(yàn)結(jié)果具有有效性。方差分析結(jié)果顯示，A、B、C三因素的影響沒有顯著性差異（>0.05），從P值的大小中反映出A因素的影響最大，這與極差分析的結(jié)果相符合。
表3正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析
2.2重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
精密稱取樣品5份，根據(jù)以上所選最佳實(shí)驗(yàn)條件，對鳳尾茶樣品中黃酮類成分的含量進(jìn)行測定。由表4結(jié)果可知，樣品總黃酮含量平均為52.35mg／g，RSD為1.12％。說明該方法的重復(fù)性較好。表2正交試驗(yàn)中第6組總黃酮提取率為54.38mg／g，高于精密度實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，可能由于實(shí)驗(yàn)方法和操作上存在一定誤差精密吸取樣品總黃酮提取液0.5mL共5份，分別u），NN體積的10ug/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。由表5結(jié)果可知，樣品加標(biāo)后回收率在95.74％～102.42％之間，平均回收率達(dá)99.69%。
表4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表5回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在60min內(nèi)每隔15arin分別測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的吸光度，吸光度值均未發(fā)生改變。放置2、4、8h，吸光度也基本不變，說明各樣品提取液及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品顯色反應(yīng)較穩(wěn)定。2-3熱水浸提與微波水提取的比較結(jié)果單純用90℃熱水浸提30min，總黃酮提取率為4.489％，明顯低于熱水浸提后再在最佳提取條件下用微波輔助提取的5.235％，若不經(jīng)90℃熱水浸提30min，其余條件不變，總黃酮的提取為4.861％。進(jìn)一步說明了微波提取法可提高待測組分的提取率，而在本實(shí)驗(yàn)中，微波提取前先用熱水浸提也是必要的。
3結(jié)論
云南鳳尾茶是一種富含黃酮類化合物的藥食兩用的植物，通過本實(shí)驗(yàn)確定了微波輔助水提取其中總黃酮的最佳工藝為：原料經(jīng)90℃熱水浸提30min，料液比1：30，微波功率400W，微波提取時(shí)間5rnin，提取率為5.235％。說明微波提取法作為一種高效、節(jié)能、省時(shí)的技術(shù)用于云南風(fēng)尾茶總黃酮的測定是可行的。該實(shí)驗(yàn)對云南風(fēng)尾茶的開發(fā)研究和綜合利用奠定了理論基礎(chǔ)。
